Các loại khác yêu cầu làm cứng mô bằng cách đông lạnh hoặc ngâm parafin. Điều này là do dao cắt dù sắc bén nhưng khi đẩy về phía trước thành một khối mô mềm sẽ nén vào mô phía trước chứ không cắt được. Khi bị nén đủ lực đẩy về phía sau, mô sẽ bị cắt đột ngột chứ không xuyên thẳng, lưỡi cắt xiên và lực nén không đều sẽ tạo ra độ lệch. Tuy nhiên, mô mềm có thể được cắt bằng cách di chuyển nhanh lưỡi dao qua lại, do đó tạo ra hiệu ứng cắt khi lưỡi dao từ từ tiến về phía trước. Tại sao cắt mềm?

Ưu điểm của :

• Không làm vỡ màng tế bào; cytosol vẫn còn trong tế bào.
• Nhuộm chất lượng hơn, không có cytosol trong mô ngoại bào. Tốt hơn cho HRP, v.v.
• Có thể giữ cho tế bào sống. Mô có thể được oxy hóa dưới môi trường trong khi cắt.
• Thiết lập nhanh chóng, gắn mô vào. Không cần đóng gói.

Nhược điểm của :

• Hoạt động chậm hơn nhiều so với máy điều lạnh hoặc máy cắt tiêu bản quay.
• Các phần phải dày, từ 50 micron trở lên.
• Khối mà các phần được lấy không được quá dày.

Các vấn đề gặp phải trong

Góc cắt

Dao cắt có thể được đặt ở mọi góc độ. Góc cắt chính xác chỉ phụ thuộc vào đặc tính của lưỡi dao. Tuy nhiên, hậu quả của việc góc cắt không chính xác sẽ khác nhau tùy thuộc vào đặc tính của vật liệu được cắt như minh họa dưới đây.

Hình ảnh này từ một hướng dẫn sử dụng cho thấy góc lưỡi dao và góc hở không chính xác. “Góc cắt” là góc giữa thân lưỡi dao và hướng chuyển động. Lưu ý rằng có một góc xiên ở cạnh trước của lưỡi dao. Điều này là cần thiết cho việc sản xuất lưỡi dao. Góc hở là góc giữa góc xiên dưới và hướng chuyển động. Góc cắt buộc mô phải uốn cong lên ở phía trước lưỡi dao. Điều này nén các ô ở một bên của phần ở chỗ uốn cong và kéo căng chúng ở phía bên kia. Sự biến dạng này phải luôn được giảm thiểu. Tuy nhiên, nếu góc lưỡi dao bằng 0 thì góc hở sẽ âm vì góc xiên vẫn còn đó. Mặt sau của góc xiên dưới sẽ đẩy xuống và nén khối khi nó đi qua mô. Điều này gây ảnh hưởng đến bất kỳ ứng dụng nào. Để tránh rủi ro này, góc hở, góc giữa góc xiên trên lưỡi dao và đường tiến phải lớn hơn 0. Ở mức 0, vẫn xảy ra ma sát. Một góc khoảng 1° sẽ là hoàn hảo. Lưu ý trong hình ảnh rằng nó nghiêng khoảng 10-15 độ và do đó mô sẽ bị uốn cong nhiều hơn mức cần thiết. Do đó, góc cắt chính xác phụ thuộc vào và lớn hơn một chút so với góc xiên của dao cắt được sử dụng và không có thuộc tính nào khác.

Biên độ dao động

Vì lý do cơ học liên quan đến tần số dao động tự nhiên, về mặt cơ học không nên tăng tốc độ chuyển động qua lại trên cùng một phạm vi. Tuy nhiên, bằng cách tăng biên độ dao động, với mỗi dao động vẫn có cùng tần số, người ta có thể khiến dao cắt di chuyển nhanh hơn so với phần mô trong thời gian đó. Miễn là biên độ lớn hơn không làm rách mô ở các cực hoặc gây rung theo chiều dọc của dao thì càng tốt, đặc biệt đối với các mô cần nén.

Tốc độ tiến về phía trước

Nếu lưỡi dao trượt ra khỏi khối mô hoặc nén mô, hãy thử di chuyển chậm hơn. Đối với các ứng dụng quan trọng nhất, chẳng hạn như chụp ảnh huỳnh quang kép canxi trong các phần mô sống, càng chậm thì càng tốt, một số sử dụng 10 phút cho mỗi phần, miễn là mô vẫn còn sống khi bạn có phần đó. Sự đánh đổi là tốc độ hoàn thành công việc so với chất lượng của từng phần.

Phần dày hoặc mỏng

Nếu thiết bị đang cắt các phần thay thế có độ dày khác nhau thì có một số nguyên nhân có thể xảy ra. Góc hở âm là góc thường gặp; góc cắt quá thấp. Vấn đề khác là mô và dao cắt chưa được đặt cố định. Một nguyên nhân khác có thể là do mô có chiều cao cao so với đế hỗ trợ và bị uốn cong ở phía trên nên mô đang di chuyển. Cắt khối nhỏ hơn nếu khả thi hoặc tìm cách hỗ trợ mô tốt hơn.

Nguồn:

Minh Khang là nhà phân phối và nhập khẩu trực tiếp dòng sản phẩm máy cắt tiêu bản từ hãng Leica Biosystems.